平行反应监测(Parallel Reaction Monitoring,PRM)是质谱分析中的一种方法,广泛用于生物分子,特别是蛋白质的定量分析。然而,关于PRM是否属于定量的问题,往往会引发疑惑。那么,PRM真的是定量的吗?在这篇文章中,我们将详细探讨这个问题。
1. 平行反应监测(PRM)简介
PRM是一种质谱技术,其在靶向蛋白质分析中尤其有用。它利用了高分辨质谱仪的精确度,通过选择特定的前体离子(代表目标蛋白质的特异性肽段),并在碰撞细胞中对其进行分解,然后监测所有产生的碎片离子。这样,通过测量这些碎片离子的强度,可以推断出目标蛋白质的量。
图1
2. 定量和相对定量
定量方法需要对样品中目标分子的确切浓度进行度量,这需要使用一个准确的浓度标准或内标。相对定量则是基于比较,在同一样品中或者在不同样品中比较目标分子的丰度。
3. PRM在定量中的应用
PRM本身并不直接提供定量,但当结合适当的内标技术时,可以实现定量。其中一种常用的内标是稳定同位素标记的肽段(如13C、15N标记的肽段)。这种标记的肽段在质谱中的表现与自然丰度的肽段几乎相同,但由于质量的微小差异,可以在质谱图上将它们区分开来。
首先,我们需要知道内标肽段的准确浓度,然后将其添加到样品中。在质谱分析中,由于内标肽段和样品中的自然丰度肽段同时被测量,因此可以通过比较它们的峰高或面积来推算出目标蛋白质的浓度。这种方法可以消除实验过程中的各种变量,如样品制备、离子化效率等。
因此,尽管PRM本身不是定量技术,但结合适当的内标技术,PRM可以用于定量。这使得PRM成为了蛋白质组学研究中非常强大的工具,因为它可以精确、可靠地测量目标蛋白质的丰度,从而提供了关于生物系统状态的重要信息。
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